单克隆丙种球蛋白血症概述

• 定义：源于单个浆细胞克隆性异常增殖，包括MGUS和恶性单克隆丙种球蛋白血症，如MM等
• 特征：血清或尿液中存在结构均一且呈单克隆性的异常免疫球蛋白或其片段，即M蛋白
• M蛋白类型：完整免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA、IgD或IgE型）、游离轻链（κ或λ）、游离重链（γ、α、μ、δ或ε型）
• M蛋白检测意义：判断评估疾病风险及疗效预后，检测和鉴定是临床管理MG的关键

实验室检测技术

• 筛查、鉴定和定量技术：蛋白电泳、免疫固定电泳、免疫分型、质谱检测和免疫化学法
• 血清蛋白电泳：M蛋白筛查首选试验，常用琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳
• 免疫固定电泳：用于M蛋白分型鉴定
• 免疫分型：用于M蛋白检测
• 质谱检测：用于M蛋白检测
• 免疫化学法：用于M蛋白定量
• 游离轻链检测：轻链型MM及其他相关疾病诊断和疗效评估常用项目

血清蛋白电泳

检测方法原理

• 原理：利用血清蛋白分子量、等电点和电场迁移率差异，分离血清蛋白并相对定量
• 区带：白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白共5个区带，M蛋白通常位于γ区，也可能在α2区至γ区之间
• 常用方法：琼脂糖凝胶电泳和毛细管电泳
• 共识1：SPE作为M蛋白筛查试验，其LOD应至少达到1 g/L（推荐）

血清蛋白电泳图谱中的M蛋白

• M蛋白特征：α2区至γ区之间，基底较窄、高而尖锐的异常峰，γ区异常峰高度与宽度比例超2∶1，β区和α2区超1∶1
• 进一步鉴定：SPE图谱出现M蛋白异常峰，需通过IFE进一步鉴定类型
• 其他疾病影响：其他疾病状态可能导致SPE图谱区带异常，SPE会遗漏轻链型M蛋白
• 共识2：SPE图谱正常但临床高度怀疑轻链型浆细胞疾病时，建议做IFE和FLC检测（强推荐）

结果报告

• 规范化要素：组分、单位、电泳图谱、M蛋白提示、切峰方法、解释性评论
• 共识3：SPE报告应包括白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白(β1和β2)以及γ球蛋白的百分比(%)，保留至少小数点后1位。若检测到异常峰，应在报告中备注“可疑M蛋白，建议IFE（或CEI）检测”（推荐）。实验室需要建立适用于SPE报告的参考区间（推荐）

M蛋白定量及质量控制注意事项

• 实验室M蛋白定量：结合IFE图谱位置，在SPE图谱手动切峰或用CEI面积百分比计算，常用PD法和TS法，同一实验室应统一切峰方式，建立SOP，对β区M蛋白推荐免疫化学法测定
• 实验室间M蛋白定量：缺乏统一参考方法，各实验室应定期参加EQA，偏差标准应控制在疗效监测标准范围，国内暂未开展EQA，建议患者选择同一实验室随访
• 共识4：各实验室应根据M蛋白的形态和区带位置，在SPE图谱上采用适宜的切峰方式（PD法或TS法），切峰方式需始终保持一致（推荐）。每个实验室应定期参加M蛋白定量的EQA，提高实验室结果的准确性（推荐）。M蛋白定量EQA偏差的质量目标应根据其浓度设定不同目标（推荐）
• M蛋白定量报告：浓度低于1 g/L不宜定量报告，轻链型M蛋白浓度参考免疫比浊法测得的血清游离轻链浓度
• 共识5：浓度低于1 g/L的M蛋白不宜进行定量报告（推荐）。如果IFE中仅检测到轻链型M蛋白，浓度应参考免疫比浊法测得的血清游离轻链浓度（推荐）
• M蛋白定量切峰方式
  • PD法：γ蛋白区域高耸尖峰两侧底部垂直向下直线划定切峰边界，峰下区域涂黑
  • TS法：γ蛋白区域尖峰底部横向倾斜切线连接峰两侧偏转点，切线以上峰形区域涂黑

检测影响因素

• 内源性物质
  • 纤维蛋白原：存在于凝血功能障碍、抗凝治疗或采集不当血清样本，迁移到β或γ区域，误认为单克隆丙种球蛋白，建议标本预处理后检测
  • 血红蛋白：溶血样本因血管内溶血或采集不当引起，复合物在α2和β区域显示不连续条带，血管内溶血选IFE替代，采集或处理不当则重新采集标本
• 外源性物质
  • 抗代谢药物和抗菌药物：部分药物在SPE图谱产生额外尖峰
  • 染料：造影剂干扰产生异常峰，形成类单克隆组分
  • 明胶基质的血浆代用品：诱导γ球蛋白比例增加，形成类β - γ桥
  • 羟基钴胺素：注射后血清SPE在α1球蛋白/白蛋白区域出现异常峰
  • 单克隆抗体免疫治疗：治疗期间和后几周，部分药物在电泳图谱呈现微小M蛋白尖峰，需与临床沟通
• 共识6：SPE受内源性或外源性干扰，需考虑采用其他方法检测

免疫固定电泳和毛细管电泳免疫分型

检测方法原理

• IFE：通过琼脂糖凝胶分离蛋白质，用特异性抗体沉淀M蛋白呈现染色条带，是M蛋白检测常用技术，可鉴定分型
• CEI：毛细管区带电泳 - 免疫削减法，自动化操作提升效率，采用“图谱减法”原理，可规避干扰，实现定性与定量协同分析，但依赖电泳图谱解析经验
• 共识7：IFE是鉴定M蛋白、区分重链和轻链类型常用方法，建议LOD达0.2 g/L

性能要求

• CEI能鉴定M蛋白类型、定位及定量，定量评估M蛋白浓度优先用CEI计算面积百分比
• IFE与蛋白电泳结合提高检测限，利于M蛋白检出
• 共识8：IFE报告结合蛋白电泳结果，标注相关内容；定量评估优先用CEI计算面积百分比

特殊类型M蛋白的检测

• IgD型和IgE型MM少见，常规试剂盒可能导致漏诊或误诊
• IgD和IgE含量低，SPE图谱不一定出现M蛋白异常峰，需免疫电泳检测
• 观察到明显轻链条带且IgG、IgA和IgM定量降低，补充特殊重链抗体筛查，有条件进行平行阳性对照，IFE可鉴定，CEI无法检测
• 共识9：IFE观察到特定沉淀线，只存在κ和λ轻链反应，条件许可补充特殊IFE

结果报告

• IFE报告内容：M蛋白情况、类型、异常条带描述、图谱、既往结果、解释、备注、建议
• 注意事项
  • 多个M蛋白条带报告建议：区分M蛋白类型，结合临床信息评估报告；不同重链和轻链分别检测，相同重链和轻链考虑为相同M蛋白，浓度以总和报告
  • M蛋白类型改变报告建议：报告新发M蛋白类型，根据病史等做解释性备注，必要时建议3 - 6个月内进行相关检测
• 共识10：不同重链和轻链M蛋白分别报告；相同重链和轻链M蛋白考虑为相同，浓度总和报告；出现新发弱阳性条带，有临床需要建议3 - 6个月内进行相关检测

检测影响因素

• 内源性物质
  • 冷球蛋白：低温沉淀，升温溶解，重新采集血清并保证37℃操作；重新采集样本，保持在 $37~^{\circ}\text{C}$，直到完全凝固并进行离心（不常见）
  • 高浓度球蛋白：多克隆背景影响IFE条带判读；稀释降低抗原浓度（常见）
  • 大分子聚合物：IgM在IFE凝胶点样处或泳道出现非特异性沉淀线，用强还原剂解聚后检测；β - 巯基乙醇解聚（不常见）
  • 嗜异性抗体：与IFE抗体试剂结合造成假阳性；临床沟通（少见）
  • 多克隆IgG4：升高表现为深染多克隆条带，根据浓度稀释样本判读条带；IgG4定量检测或稀释（少见）
• 外源性化合物：单克隆免疫治疗抗体影响IFE，Hydrashift移除剂可减少干扰；使用移除剂或添加备注信息，同时保留治疗前基线结果供后续比对（常见）
• 共识11：IFE受内外源性因素干扰，建立干扰识别与处理标准操作流程

其他检测方法

FLC检测

• FLC由浆细胞合成，多发性骨髓瘤时增多及κ/λ比值变化
• 采用免疫比浊法检测，用于轻链型MM筛查和检测，评估治疗效果和判断预后
• 纳入MM诊断标准，SPE、IFE、FLC联合筛查敏感度达98.6%

尿液检测

• 试纸法难检测本 - 周蛋白，尿液蛋白电泳对诊断游离轻链型MM重要
• 检测到M蛋白或FLC异常应进行尿液蛋白电泳和尿IFE检测；高度怀疑MM或原发性淀粉样变性考虑血清或尿IFE检测
• 毛细管电泳尿液需预处理，不宜用免疫化学方法筛查，单克隆FLC用随机尿样本，测M蛋白浓度用24 h尿液样本
• 尿FLC检测干扰因素是缺乏标准化尿液浓缩方案，可根据肌酐浓度校正结果，临床以g/24 h或mg/24 h报告尿液M蛋白排泄量，有助于确定疗效或疾病进展情况

质谱检测

• 优势：M蛋白定量中灵敏度和准确性高于电泳法，有望改进传统检测方法局限性
• 建议：临床实践和临床试验中作为IFE替代方法检测M蛋白；临床实践中区分残留M蛋白与治疗性单克隆抗体；准确解释和确定临床试验中患者的完全缓解

总结

• 目的：提升MG实验室检测质量，减少误诊漏诊
• 措施：明确SPE和IFE等检测流程、报告格式及异常结果解析规范，提出消除干扰因素、确保结果一致性建议
• 意义：为疾病早期诊断与精准治疗提供实验室支撑